Protocolos de aislamiento y expansión de MSC de la gelatina de Wharton
Metodología detallada para el aislamiento, la caracterización, el control de calidad y la expansión a gran escala de células madre mesenquimales derivadas de la gelatina de Wharton para aplicaciones clínicas.
Explante
Método de aislamiento
Hipoxia al 3 %
Condiciones de cultivo
P5 (34 veces)
Capacidad de expansión
Panel de 7 pruebas
Pruebas de control de calidad
Protocolo de aislamiento
Los cordones umbilicales se obtienen de partos a término de madres sanas, previo consentimiento informado. Los cordones se procesan en las 4 horas siguientes al parto, en condiciones conformes a las GMP. La matriz de gelatina de Wharton se separa de los vasos umbilicales y de la membrana amniótica y después se procesa mediante un método de explante optimizado que conserva la viabilidad celular y mantiene un alto rendimiento.
Las células se cultivan en medios sin componentes xenogénicos ni suero, suplementados con lisado de plaquetas humanas (hPL), en condiciones de hipoxia con un 3 % de O₂. Se ha demostrado que estas condiciones mejoran la capacidad proliferativa, la secreción paracrina y la potencia inmunomoduladora en comparación con el cultivo normóxico estándar (21 % de O₂).
Cinética de expansión: hipoxia frente a normoxia (factor de expansión)
Comparación de los métodos de aislamiento
Inmunofenotipado: expresión de marcadores de superficie
| Marcador | Expresión (%) | Requisito de la ISCT | Estado |
|---|---|---|---|
| CD73 | 99.2% | >95 % | ✓ Positivo |
| CD90 | 98.7% | >95 % | ✓ Positivo |
| CD105 | 97.4% | >95 % | ✓ Positivo |
| CD34 | 0.3% | <2 % | ✓ Negativo |
| CD45 | 0.5% | <2 % | ✓ Negativo |
| CD14 | 0.2% | <2 % | ✓ Negativo |
| HLA-DR | 1.1% | <2 % | ✓ Negativo |
Controles de calidad para la liberación de lotes
| Prueba | Especificación | Resultado |
|---|---|---|
| Esterilidad (USP <71>) | Sin crecimiento a los 14 días | Superada |
| Endotoxinas (LAL) | <5 UE/kg | 0,8 UE/kg |
| Micoplasma (PCR) | No detectado | No detectado |
| Análisis del cariotipo | Normal 46,XX o 46,XY | Normal |
| Viabilidad (azul de tripano) | >90 % | 97,2 % |
| Exactitud del recuento celular | ±10 % | ±4,3 % |
| Diferenciación trilineal | Confirmada | Confirmada |
Conclusiones principales
- •El aislamiento por explante ofrece la mayor viabilidad (97,8 %) y conserva mejores características de troncalidad.
- •El cultivo en hipoxia (3 % de O₂) logra una capacidad de expansión 2,2 veces mayor en el pase 5 que en normoxia.
- •Todos los lotes cumplen de forma constante los criterios mínimos de la ISCT para la identificación de las MSC.
- •Los medios sin componentes xenogénicos y suplementados con hPL eliminan los riesgos asociados al suero fetal bovino.
- •El panel completo de 7 pruebas de control de calidad garantiza la seguridad, la esterilidad y la potencia de cada lote liberado para uso clínico.
Referencias seleccionadas
- Dominici M, et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. Cytotherapy. 2006;8(4):315-317.
- Batsali AK, et al. Mesenchymal stem cells derived from Wharton's Jelly of the umbilical cord. World J Stem Cells. 2013;5(2):43-56.
- Mushahary D, et al. Isolation, cultivation, and characterization of human mesenchymal stem cells. Cytometry A. 2018;93(1):19-31.
¿Quiere conocer sus opciones de tratamiento?
Solicite una consulta gratuita y sin compromiso con nuestros especialistas en medicina regenerativa. Atendemos a pacientes de más de 40 países.
O llame directamente: +90 534 856 92 92