Protocollen voor isolatie en expansie van MSC's uit de gelei van Wharton
Gedetailleerde methodologie voor de isolatie, karakterisering, kwaliteitscontrole en grootschalige expansie van mesenchymale stamcellen uit de gelei van Wharton voor klinische toepassingen.
Explantaat
Isolatiemethode
Hypoxie 3%
Kweekcondities
P5 (34-voudig)
Expansiecapaciteit
Panel van 7 tests
Kwaliteitscontroles
Isolatieprotocol
Navelstrengen worden na geïnformeerde toestemming verzameld bij gezonde, voldragen bevallingen en binnen 4 uur na de bevalling onder GMP-conforme omstandigheden verwerkt. De matrix van de gelei van Wharton wordt gescheiden van de vaten van de navelstreng en het vruchtvlies en vervolgens verwerkt met een geoptimaliseerde explantaatmethode die de viabiliteit van de cellen behoudt en toch een hoge opbrengst geeft.
De cellen worden gekweekt in xenovrij, serumvrij medium met humaan bloedplaatjeslysaat (hPL), onder hypoxische omstandigheden (3% O₂). Aangetoond is dat dit het delingsvermogen, de paracriene secretie en de immuunmodulerende potentie vergroot ten opzichte van standaardkweek onder normoxie (21% O₂).
Expansiekinetiek: hypoxie versus normoxie (expansiefactor)
Vergelijking van isolatiemethoden
Immunofenotypering: expressie van oppervlaktemarkers
| Marker | Expressie (%) | ISCT-vereiste | Status |
|---|---|---|---|
| CD73 | 99.2% | >95% | ✓ Positief |
| CD90 | 98.7% | >95% | ✓ Positief |
| CD105 | 97.4% | >95% | ✓ Positief |
| CD34 | 0.3% | <2% | ✓ Negatief |
| CD45 | 0.5% | <2% | ✓ Negatief |
| CD14 | 0.2% | <2% | ✓ Negatief |
| HLA-DR | 1.1% | <2% | ✓ Negatief |
Vrijgavepanel voor kwaliteitscontrole
| Test | Specificatie | Resultaat |
|---|---|---|
| Steriliteit (USP <71>) | Geen groei na 14 dagen | Geslaagd |
| Endotoxine (LAL) | <5 EU/kg | 0,8 EU/kg |
| Mycoplasma (PCR) | Niet aangetoond | Niet aangetoond |
| Karyotypering | Normaal 46,XX of 46,XY | Normaal |
| Viabiliteit (trypaanblauw) | >90% | 97,2% |
| Nauwkeurigheid celtelling | ±10% | ±4,3% |
| Differentiatie in drie lijnen | Bevestigd | Bevestigd |
Belangrijkste conclusies
- •Isolatie met de explantaatmethode geeft de hoogste viabiliteit (97,8%) en behoudt de beste stamceleigenschappen.
- •Hypoxische kweek (3% O₂) geeft bij passage 5 een 2,2 keer grotere expansiecapaciteit dan normoxie.
- •Alle batches voldoen steeds aan de minimale ISCT-criteria voor de identificatie van MSC's.
- •Xenovrij medium met hPL sluit de risico's van foetaal runderserum uit.
- •Een uitgebreid kwaliteitspanel met 7 tests waarborgt de veiligheid, steriliteit en potentie van elke batch die voor klinisch gebruik wordt vrijgegeven.
Geselecteerde referenties
- Dominici M, et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. Cytotherapy. 2006;8(4):315-317.
- Batsali AK, et al. Mesenchymal stem cells derived from Wharton's Jelly of the umbilical cord. World J Stem Cells. 2013;5(2):43-56.
- Mushahary D, et al. Isolation, cultivation, and characterization of human mesenchymal stem cells. Cytometry A. 2018;93(1):19-31.
Benieuwd naar uw behandelmogelijkheden?
Plan een gratis, vrijblijvend consult met onze specialisten in regeneratieve geneeskunde. Wij behandelen patiënten uit meer dan 40 landen.
Of bel direct: +90 534 856 92 92